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《生物技术》 2017年04期
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丹参SmIPI基因RNA干扰表达载体构建及遗传转化

尹艳  张宏晨  徐妍妍  高伟  张夏楠  
【摘要】:[目的]构建丹参SmIPI1和SmIPI2基因的RNA干扰植株体系。[方法]利用Gateway技术分别构建SmIPI1和SmIPI2的干扰表达载体p K7GWIWG2D(Ⅱ),并借助根癌农杆菌EHA105菌株介导遗传转化,并通过抗性标记筛选、Egfp荧光和qRT-PCR检测阳性植株和转化效果。[结果]表达克隆构建后转化大肠杆菌菌液PCR检测显示阳性,遗传转化外植体并经抗性培养基继代筛选获得的转化植株根尖在荧光显微镜下呈强烈绿色荧光,且SmIPI1和SmIPI2基因的相对表达量下调幅度分别在64%~82%和23%~78%之间。[结论]成功构建丹参SmIPI1和SmIPI2基因的RNA干扰表达载体并转化丹参植株,为探索SmIPI基因家族成员各自功能问题提供了研究材料基础。
【作者单位】贵州大学药学院;首都医科大学中医药学院;
【关键词】丹参 SmIPI RNAi 农杆菌介导
【基金】:国家自然科学基金项目(“丹参异戊烯焦磷酸异构酶基因在MEP和MVA途径中的功能研究”,No.81303166) 贵州大学研究生创新基金项目(“丹参异戊烯焦磷酸异构酶基因植物干扰体系建立及干扰效果研究”,No.研农20160008)
【分类号】:Q943.2;S567.53
【正文快照】:
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是通过双链RNA在细胞内诱导同源基因表达下调或沉默的一种现象[1-2]。经过多年的研究实践,RNA干扰技术日趋成熟,应用也越来越广泛,有望在未来系统地识别植物基因功能的研究里成为一个普遍高效的工具。RNA干扰表达载体的构建是RNA干扰体系建立最

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